Indicadores normales: Normalmente, las proteínas se encuentran en la orina en cantidades mínimas, que no se detectan mediante reacciones cualitativas ordinarias. El límite superior de proteína normal en la orina es 0,033 g/l. Si el contenido de proteínas es superior a este valor, las pruebas de calidad de proteínas resultan positivas.

Importancia clínica de la definición:

La aparición de proteínas en la orina se llama proteinuria. La proteinuria puede ser falsa y renal. La proteinuria extrarrenal puede ocurrir en presencia de impurezas proteicas de los órganos genitales (vaginitis, uretritis, etc.), la cantidad de proteína es insignificante, hasta 0,01 g/l. La proteinuria renal puede ser funcional (con hipotermia, esfuerzo físico, fiebre) y orgánica, con glomerulonefritis, pielonefritis, nefritis, nefrosis e insuficiencia renal. En caso de proteinuria renal, el contenido de proteínas puede ser de 0,033 a 10 - 15 g/l, a veces más.

Definición cualitativa.

Principio del método: basado en el hecho de que la proteína se coagula (se vuelve visible) bajo la influencia de ácidos inorgánicos. El grado de turbidez depende de la cantidad de proteína.

Detección de proteínas en orina con ácido sulfosalicílico al 20%.

Reactivos: Solución de ácido sulfosalicílico al 20%. Equipo: fondo oscuro.

Progreso del estudio:

2. Se vierten 2 ml de orina preparada en 2 tubos de ensayo del mismo diámetro. 1 tubo de ensayo – control, 2 – experimento. Agregue 4 gotas de ácido sulfosalicílico al 20% al tubo de ensayo.

3. El resultado se anota sobre un fondo oscuro.

4. En presencia de proteínas, la orina en el tubo de ensayo se vuelve turbia.

Determinación cualitativa de proteínas en orina - tiras reactivas.

Para detectar la proteinuria se utilizan diversas tiras monotest: Albufan, Albustix, Biofan E y politests: Triscan, Nonafan, etc.

Cuantificación.

Detección de proteínas en orina mediante el método de Roberts-Stolnikov.

Principio del método: basado en el hecho de que la proteína se coagula (se vuelve visible) bajo la influencia de ácidos inorgánicos. El grado de turbidez depende de la cantidad de proteína (es decir, prueba del anillo de Heller). Cuando la concentración de proteínas en la orina es de 0,033 g/l, aparece un anillo blanco fino en forma de hilo al cabo de 3 minutos después de estratificar la orina.

reactivos: solución de ácido nítrico al 50% o reactivo de Roberts (98 partes de solución saturada de cloruro de sodio y 2 partes de ácido clorhídrico concentrado) o reactivo de Larionova (98 partes de solución saturada de cloruro de sodio y 2 partes de ácido nítrico concentrado).

Equipo: fondo oscuro.

Progreso del estudio:

1. Requisitos para la orina: la orina debe tener un pH ácido (o ligeramente ácido) y debe ser transparente, para ello se centrifuga; La orina alcalina se acidifica hasta obtener una reacción ligeramente ácida utilizando papel indicador para control.

2. Vierta 2 ml de solución de ácido nítrico al 50% o uno de los reactivos en el tubo de ensayo, luego coloque con cuidado el mismo volumen de orina preparada a lo largo de la pared del tubo de ensayo usando una pipeta.

3. La muestra se deja durante 3 minutos.

4. Después de 3 minutos, se informa el resultado. El resultado se observa sobre un fondo oscuro con luz transmitida. Si el anillo es ancho y compacto, entonces la orina se diluye con agua destilada y se vuelve a colocar en capas sobre el reactivo.

5. La orina se diluye hasta que después de 3 minutos se forme un anillo fino en forma de hilo.

C = 0,033 g/l x grado de dilución.

Tanto la determinación cualitativa como cuantitativa de proteínas en la orina es importante para la clínica.

Pruebas cualitativas para determinar proteínas en orina.
Se han propuesto más de 100 reacciones para la determinación cualitativa de proteínas en orina. La mayoría de ellos se basan en la precipitación de proteínas por medios físicos (calentamiento) o químicos. La presencia de proteínas se confirma por la aparición de turbidez.

También son de interés las muestras secas colorimétricas.

A continuación solo se describirán las pruebas más importantes para la práctica.

Prueba con ácido sulfosalicílico. A varios mililitros de orina se añaden de 2 a 4 gotas de una solución de ácido sulfosalicílico al 20%. Si la reacción es positiva aparece turbidez. El resultado se designa con los términos: opalescencia, reacción débilmente positiva, positiva o fuertemente positiva. La prueba del ácido sulfosalicílico es una de las pruebas más sensibles para detectar proteínas en la orina. Detecta incluso los aumentos patológicos más pequeños de proteínas en la orina. Gracias a su sencilla técnica, esta prueba ha encontrado una amplia aplicación.

Prueba con aseptol. Aseptol es un sustituto del ácido sulfosalicílico. Puede prepararse a partir de materiales disponibles en cualquier laboratorio (fenol y ácido sulfúrico). Como reactivo se utiliza una solución de Aseptol al 20%. La prueba se realiza de la siguiente manera: en un tubo de ensayo que contiene 2-3 ml de orina, agregue 0,5-1 ml de solución de aseptol al fondo. Si aparece un anillo blanco de proteína coagulada en la interfaz entre los dos líquidos, la muestra es positiva.

prueba de heller. Debajo de unos pocos mililitros de orina, agregue 1-2 ml de ácido nítrico al 30% (gravedad específica 1,20). Si aparece un anillo blanco en el borde de ambos líquidos, la muestra es positiva. La reacción se vuelve positiva si el contenido de proteína es superior al 3,3 mg%. A veces se obtiene un anillo blanco en presencia de grandes cantidades de uratos. A diferencia del anillo proteico, el anillo de urato no aparece en el límite entre ambos líquidos, sino ligeramente por encima. Larionova sugiere utilizar como reactivo una solución de ácido nítrico al 1% en una solución saturada de sal de mesa en lugar de ácido nítrico al 30%; esto se traduce en un mayor ahorro de ácido nítrico.

Prueba con sulfuro de potasio y hierro y ácido acético.. Esta reacción permite distinguir las proteínas séricas de las nucleoalbúminas.

Se vierten cantidades iguales de orina en dos tubos de ensayo. A uno de ellos se le añaden unas gotas de una solución de ácido acético al 30%. Si el resultado es turbio en comparación con el tubo de control, la orina contiene nucleoalbúmina. Si no aparece turbidez, se mezcla el contenido de ambos tubos y se vuelve a dividir en dos partes. Se añaden unas gotas (el exceso puede convertir una prueba positiva en negativa) de una solución al 10% de sal de sangre amarilla (sulfuro de hierro y potasio) en uno de los dos tubos de ensayo. En presencia de proteínas del suero se obtiene turbidez.

En caso de orina concentrada que contenga grandes cantidades de ácido úrico y uratos, se debe realizar una prueba con sulfuro ferroso de potasio y ácido acético después de una dilución preliminar (2-3 veces) de la orina con agua. De lo contrario, puede aparecer turbidez debido al ácido úrico sedimentado.

Esto es especialmente importante al examinar la orina de los bebés, que contiene una gran cantidad de ácido úrico y urato.

De las demás pruebas cualitativas de proteínas en orina, basadas en la precipitación de proteínas, se han utilizado las siguientes: prueba de ebullición, Esbach, Purdy, Roberts, Almen, Balloni, Buro, Claudius, Corso, Dome, Goodmann-Suzanne, Jollet, Pruebas de Exton, Kamlet, Kobuladze, Liliendahl-Petersen, Polacci, Pons, Spiegler, Tanre, Thiele, Brown, Tsushiya, etc.

Al realizar pruebas de alta calidad para detectar proteínas en la orina basadas en la precipitación de proteínas, se deben observar las siguientes reglas generales, cuya violación conduce a errores importantes en el estudio.

1. La orina que se analiza debe ser ácida. Para una reacción alcalina, la orina se acidifica ligeramente con ácido acético. La producción de una muestra con orina alcalina en los casos en que se utiliza un ácido como reactivo puede conducir a la neutralización del ácido y a un resultado negativo en una reacción positiva. Esto es especialmente cierto para la prueba con ácido sulfosalicílico, ya que el ácido se añade en cantidades muy pequeñas y puede neutralizarse fácilmente.

2. La orina que se analiza debe ser clara.

3. Las muestras para determinar las proteínas en la orina siempre deben realizarse en dos tubos de ensayo, uno de los cuales sirve como control. Sin un tubo de control, es posible que no note una ligera turbidez durante las reacciones.

4. La cantidad de ácido añadido durante la prueba no debe ser demasiado grande. Una gran cantidad de ácido puede provocar la formación de albúmina ácida soluble y convertir una muestra positiva en negativa.

Debido a su sencilla técnica, las muestras secas colorimétricas merecen gran atención. Estas pruebas utilizan el efecto que tienen las proteínas sobre el color del indicador en la solución tampón (el llamado error proteico de los indicadores). Se sumerge brevemente en la orina una tira de papel de filtro empapada en tampón de citrato ácido y azul de bromofenol como indicador. La prueba es positiva si el color es azul verdoso. Al comparar la intensidad del color con los estándares de papel coloreado, se pueden sacar conclusiones provisionales y cuantitativas. El papel indicador se vende en resmas con los estándares de color correspondientes, similar al papel indicador universal.

Métodos para la determinación cuantitativa de proteínas en orina.
Se han propuesto muchos métodos para la determinación cuantitativa de proteínas en la orina. Los métodos cuantitativos precisos para determinar proteínas en material biológico no se han utilizado ampliamente para determinar proteínas en orina debido a técnicas complejas y que requieren mucha mano de obra. Los métodos volumétricos se han generalizado, especialmente el método de Esbach. Son muy simples, pero lamentablemente no son muy precisos. Los métodos del grupo Brandberg-Stolnikov también son convenientes para la clínica, ya que dan resultados más precisos que los métodos volumétricos con una técnica relativamente simple. Si tiene un fotómetro o un nefelómetro, los métodos nefelométricos también son convenientes.

método esbach. Fue propuesto por el médico parisino Esbach en 1874. Se vierten orina y un reactivo en un tubo de ensayo especial (albuminómetro de Esbach). El tubo de ensayo se cierra con un tapón de goma, se agita bien (¡sin agitarlo!) y se deja en posición vertical hasta el día siguiente. Se cuenta la división a la que llega la columna de sedimento proteico. El número encontrado muestra el contenido de proteínas. Es muy importante con el método Esbach que la orina sea ácida. La orina alcalina puede neutralizar los componentes ácidos del reactivo y prevenir la precipitación de proteínas.

Ventajas del método: es sencillo y cómodo en la práctica.

Desventajas: el método es inexacto, el resultado se obtiene en 24 a 48 horas.

Método de Brandberg-Stolnikov. Se basa en la prueba cualitativa de Geller. La prueba de Heller se puede utilizar para la determinación cuantitativa, ya que da un resultado positivo cuando el contenido de proteína es superior a 3,3 mg%. Esta es la concentración máxima de proteína por debajo de la cual la muestra se vuelve negativa.

Modificación de Ehrlich y Althausen. Los científicos soviéticos S. L. Erlikh y A. Ya Althauzen modificaron el método Brandberg-Stolnikov, indicando las posibilidades de simplificar el estudio y ahorrar tiempo en su producción.

La primera simplificación está relacionada con el momento de aparición del anillo. Se determina el momento exacto de su aparición, sin respetar necesariamente el 2º y 3º minuto.

La segunda simplificación permite determinar qué dilución se debe realizar. Los autores demostraron que la dilución requerida puede determinarse aproximadamente por el aspecto del anillo resultante. Se distinguen como hilos, anchos.
y un anillo compacto.

De los métodos nefelométricos, cabe destacar Método de Kingsberry y Clark. Vierta 2,5 ml de orina filtrada en una pequeña probeta graduada y rellénela con una solución acuosa al 3% de ácido sulfosalicílico hasta completar 10 ml. Agitar bien y después de 5 minutos fotometrizar en una cubeta de 1 cm utilizando un filtro amarillo, utilizando agua como líquido de compensación. Usando el fotómetro Pulfrich, la extinción encontrada, multiplicada por 2,5, da la cantidad de proteína en %o. En el caso de que el índice de extinción sea superior a 1,0, la orina primero se diluye 2 veces, 4 veces o incluso más.

Para tener una idea clara de la cantidad de proteínas excretadas en la orina, es necesario determinar no solo su concentración en una porción separada de orina, sino también su cantidad diaria total. Para ello, se recoge la orina del paciente durante 24 horas, se mide su volumen en mililitros y se determina la concentración de proteínas en una porción de orina diaria en g%. La cantidad de proteínas excretadas en la orina en 24 horas se determina en función de la cantidad diaria de orina en gramos.

Importancia clínica de las proteínas en la orina.

La orina humana normalmente contiene cantidades mínimas de proteínas, que no pueden determinarse mediante pruebas cualitativas de proteínas en orina ordinarias. La excreción de grandes cantidades de proteínas, en la que las pruebas cualitativas ordinarias de proteínas en la orina resultan positivas, es un fenómeno anormal llamado proteinuria. La proteinuria es fisiológica solo en un recién nacido, en los primeros 4 a 10 días después del nacimiento. El nombre comúnmente utilizado albuminuria es incorrecto, porque en la orina no solo se excretan albúminas, sino también otros tipos de proteínas (globulinas, etc.).

La proteinuria fue descubierta como síntoma diagnóstico en 1770 por Cotugno.

Las proteinurias renales funcionales más importantes en niños son las siguientes:

1. Proteinuria fisiológica del recién nacido.. Ocurre en la mayoría de los recién nacidos y no tiene importancia adversa. Esto puede explicarse por un filtro renal débil, daño al nacer o pérdida de líquidos en los primeros días de vida. La proteinuria fisiológica desaparece entre el cuarto y el décimo día después del nacimiento (más tarde en los bebés prematuros). La cantidad de proteína es pequeña. Es la nucleoalbúmina.

La albuminuria neonatal que continúa durante mucho tiempo puede ser un síntoma de lues congénitos.

2. albuminuria por accidente cerebrovascular. Son causadas por exceder el umbral de irritabilidad normal del filtro renal por importantes irritaciones mecánicas, térmicas, químicas, mentales y de otro tipo: pérdida de líquido en los bebés (proteinuria por deshidratación), baños fríos, alimentos abundantes ricos en proteínas (proteinuria alimentaria), palpación del riñón (albuminuria palpatoria), exceso de trabajo físico, miedo, etc.

La albuminuria por accidente cerebrovascular aparece más fácilmente en niños a una edad temprana que en niños mayores y adultos, ya que los riñones de un bebé y un niño pequeño se irritan más fácilmente. La albuminuria por deshidratación (trastornos de la alimentación, debilidad de líquidos, toxicosis, diarrea, vómitos) se observa especialmente en los bebés.

La albuminuria por accidente cerebrovascular es benigna. Desaparecen inmediatamente después de eliminar las causas que los provocan. El sedimento a veces contiene leucocitos individuales, cilindros y eritrocitos. La proteína suele ser nucleoalbúmina.

3. Proteinuria ortostática. Esta condición es típica de niños en edad preescolar y escolar. Ocurre debido a alteraciones vasomotoras en el suministro de sangre al riñón. Lo típico de la albuminuria ortostática (de ahí su nombre) es que aparece únicamente cuando el niño está de pie, cuando la columna está en posición lordótica. Al acostarse desaparece. Se libera nucleoalbúmina. En casos dudosos, se puede recurrir al experimento ortostático, que consiste en lo siguiente: por la noche, una hora antes de acostarse, el niño vacía la vejiga; Por la mañana, cuando se levanta de la cama, vuelve a orinar. Esta orina no contiene proteínas. Luego se coloca al niño de rodillas durante 15 a 30 minutos con un palo detrás de la espalda, entre los codos doblados de ambas manos. Se crea una posición lordótica que conduce a la liberación de proteínas, sin cambios en el sedimento.

Con albuminuria ortostática, se pueden liberar de 8 a 10 g de proteína por día.

La proteinuria renal orgánica tiene la importancia clínica más importante entre todas las proteinurias. Son causadas por enfermedades orgánicas del riñón (nefritis, nefrosis, nefroesclerosis). La proteinuria es uno de los síntomas más importantes y conocidos de la enfermedad renal orgánica.

1. En la glomerulonefritis aguda y crónica, la proteinuria ocurre con regularidad. La cantidad de proteína es moderada y no existe paralelo entre el grado de proteinuria y la gravedad de la enfermedad. Por el contrario, la nefritis crónica y más grave suele presentarse con menos proteínas que la nefritis aguda. Después de una nefritis aguda, a veces durante mucho tiempo (años), se detectan en la orina pequeñas cantidades de proteínas que no tienen significado patológico (“albuminuria residual”). No debemos olvidar que también puede producirse “nefritis sin proteinuria”. A veces, la proteína se encuentra en una porción de orina, pero no en otra. La proporción de albúmina a globulina en la nefritis aguda es baja y en la nefritis crónica es mayor.

2. En la nefroesclerosis, la cantidad de proteína en la orina es muy pequeña; a menudo se encuentran formas de la enfermedad sin proteína en la orina.

3. De todas las enfermedades renales, la nefrosis presenta la proteinuria más grave.

4. En condiciones infecciosas y tóxicas se produce la llamada proteinuria febril y tóxica. Se trata de nefrosis aguda, en la que la cantidad de proteína es pequeña. Este grupo también incluye proteinuria durante condiciones convulsivas (convulsiones), hiperfunción de la glándula tiroides, ictericia, intususcepción, enterocolitis, quemaduras, anemia grave, etc. Estas albuminuria son benignas y pasan rápidamente (albuminuria transitoria).

5. Cuando la sangre se estanca en los riñones, se produce la llamada albuminuria estancada, que es característica de los pacientes cardíacos en etapa de descompensación. También ocurre con ascitis y tumores abdominales.

En la albuminuria febril, tóxica y congestiva, el aumento de la permeabilidad del filtro renal es especialmente pronunciado. Según algunos autores, muchas de estas proteinurias se producen sin daño orgánico del parénquima renal.

albuminuria extrarrenal Generalmente son causadas por impurezas proteicas (secreciones, células descompuestas), que son secretadas por tractos urinarios y genitales enfermos. La albuminuria extrarrenal es más común debido a cistopelitis (piuria), con menos frecuencia debido a vulvovaginitis, cálculos y tumores del tracto urinario.

Con la albuminuria extrarrenal, se encuentra una gran cantidad de leucocitos y bacterias en el sedimento. Casi nunca se encuentran elementos renales. La cantidad de proteína es pequeña. La orina filtrada o centrifugada generalmente no da positivo en proteínas.

En quienes se recuperan de la pielitis, la albuminuria desaparece después de la bacteriuria y la piuria.

Como fenómeno característico, cabe destacar que en la primera infancia las enfermedades renales orgánicas aparecen muy raramente, por lo que la proteinuria orgánica también es rara. De ellos, los predominantemente febriles y tóxicos. A diferencia de la proteinuria orgánica, la albuminuria por accidente cerebrovascular es muy común en niños a una edad temprana.

En los niños mayores, la proteinuria orgánica suele ser funcional. En general, con la edad la proteinuria funcional se presenta con menos frecuencia y la proteinuria orgánica con mayor frecuencia.

Estudios electroforéticos de proteínas en orina.

Varios autores utilizan el método electroforético para estudiar las proteínas de la orina (uroproteínas). De los electroferogramas obtenidos se desprende claramente que tienen la misma composición cualitativa que las proteínas plasmáticas. Esto indica que las proteínas de la orina se originan a partir de proteínas plasmáticas.

Algoritmo para determinar proteínas en orina mediante el método express.

Objetivo: Diagnóstico precoz de la gestosis tardía.

Equipo: recipiente, frasco esterilizado, soporte con tubos de ensayo, frasco con ácido sulfosalicílico o acético al 30%, pipeta, mechero de alcohol.

1. Explique a la embarazada la necesidad de realizar este estudio.

2. Pida a la embarazada que recoja la orina en un frasco esterilizado.

3. Vierta 4-5 ml en el tubo de ensayo. prueba de orina.

4. Prueba con ácido sulfosalicílico:

Agregue de 6 a 10 gotas de ácido sulfosalicílico al 30% al tubo de ensayo con orina. Si hay proteínas en la orina, se formarán sedimentos o turbidez.

5. Prueba con ácido acético:

Se vierten de 6 a 10 ml de orina en un tubo de ensayo y se hierven en un quemador de alcohol; la orina que contiene proteínas se vuelve turbia. Agregue unas gotas de una solución de ácido acético al 3-5% en orina turbia. Si la turbidez ha desaparecido, la prueba es negativa.

Algoritmo para determinar la actividad biológica del útero durante el parto. "Prueba de oxitocina".

Objetivo: determinar la preparación del cuerpo para el parto.

Equipo: 0,9% - solución salina 500,0, 5 unidades de oxitocina, jeringa 10,0, alcohol 70%, algodón, reloj con segundero.

1. Explíquele a la embarazada la necesidad de realizar este estudio.

2. Solicitar a la embarazada que asegure un completo descanso emocional y físico durante 15 minutos mientras está acostada boca arriba. Esto es necesario para prevenir posibles contracciones del útero debido a la influencia de diversos factores.

3. Llene una jeringa de 10 gramos con 10 ml. Solución preparada a razón de 0,01 UI de oxitocina por 1 ml. Solución isotónica de cloruro de sodio. La solución se prepara de la siguiente manera:

Se diluyen 5 unidades (1 ml) de oxitocina en 500 ml. solución isotónica de cloruro de sodio (5 ID: 500,0 = 0,01 UNIDAD: 1 ml). Del frasco con una jeringa de 10 gramos, extraiga 10,0 de la solución resultante para la prueba.

4. Realice una punción venosa y, asegurándose de que no provoque contracciones uterinas, comience la administración intravenosa de solución de oxitocina.

5. Determine el momento para comenzar a administrar la solución.

6. “Cecina”, 1 ml. a intervalos de 1 minuto, inyecte la solución, pero no más de 5 ml. Detenga la administración de la solución cuando se produzcan contracciones uterinas.

7. La prueba se considera positiva si las contracciones uterinas se registran dentro de los primeros 3 minutos desde el inicio de las inyecciones y el parto ocurre dentro de las siguientes 24 a 48 horas. Las contracciones del útero que aparecen después de 4 minutos desde la inserción se consideran una prueba negativa: el parto se producirá en 3 a 8 días.

8. Registre el resultado en la documentación primaria.

5.4. Algoritmo para evaluar la “madurez” del cuello uterino.

Objetivo: determinar la preparación del cuello uterino para el parto.

Equipo: desinfectante, trapos, guantes esterilizados, mesa.

1. Explique a la embarazada la necesidad de realizar este procedimiento.

2. Trate la silla con un trapo empapado en una solución de hipoclorito de calcio al 0,5%.

3. Coloque un pañal limpio en la silla.

4. Colocar a la embarazada en el sillón ginecológico.

5. Trate los genitales externos con una de las soluciones desinfectantes.

6. Utilice guantes esterilizados.

7. Con la mano izquierda, separe los labios mayores con el primer y segundo dedo e inserte el segundo o tercer dedo de la mano derecha en la vagina.

En personas completamente sanas también se encuentra una pequeña cantidad de proteína en la orina diaria, pero los métodos utilizados actualmente no detectan concentraciones tan pequeñas en porciones individuales. Aproximadamente el 70% de la proteína en la orina de una persona sana es uromucoide, una proteína que es producto del tejido renal; Por tanto, la proporción de proteína glomerular en la orina de personas sanas es insignificante y la proteinuria normalmente es de 50 a 150 mg/día, siendo la mayoría de las proteínas de la orina idénticas a las proteínas séricas.

Se acostumbra distinguir las siguientes formas de proteinuria según el lugar de aparición: prerrenal, asociada con una mayor degradación de las proteínas tisulares, hemólisis grave; renal, causada por patología renal, que se puede dividir en glomerular y tubular; posrenal, asociado con patología del tracto urinario y con mayor frecuencia causado por exudación inflamatoria.

Dependiendo de la duración de la existencia, se distingue la proteinuria constante, que existe durante muchas semanas e incluso años, y transitoria, que aparece periódicamente, a veces incluso en ausencia de patología renal, por ejemplo, con fiebre e intoxicación grave. Es aconsejable distinguir entre la variabilidad de la proteinuria: con una pérdida diaria de proteínas de hasta 1 g - moderada, de 1 a 3 g - moderada y más de 3 g - grave.

La detección de proteínas con un peso molecular relativamente grande en la orina indica una falta de selectividad del filtro renal y su grave daño. En estos casos se habla de baja selectividad de la proteinuria. Por lo tanto, la determinación de fracciones proteicas de la orina está ahora muy extendida. Los métodos más precisos son la electroforesis en gel de almidón y poliacrilamida.
Según los resultados obtenidos por estos métodos, se puede juzgar la selectividad de la proteinuria.

La mayoría de los métodos cualitativos y cuantitativos para determinar las proteínas en la orina se basan en su coagulación en el volumen de orina o en la interfaz de los medios (orina y ácido); si hay una manera de medir la intensidad de la coagulación, entonces la muestra se vuelve cuantitativa.

Prueba unificada con ácido sulfosalicílico:

Reactivo requerido:

Solución al 20% de ácido sulfosalicílico.

Progreso del estudio:

Se vierten 3 ml de orina filtrada en 2 tubos de ensayo. Se añaden de 6 a 8 gotas del reactivo al tubo de ensayo. Sobre un fondo oscuro se compara el tubo de control con el tubo de ensayo. La turbidez en el tubo de ensayo indica la presencia de proteínas, la muestra se considera positiva.

Si la reacción de la orina es alcalina, antes del estudio se acidifica con 2-3 gotas de una solución de ácido acético al 10%.

Método unificado de Brandberg-Roberts-Stolnikov:

El método se basa en la prueba del anillo de Heller, que consiste en que en el borde del ácido nítrico y la orina, en presencia de proteínas, ésta se coagula y aparece un anillo blanco.

Reactivo requerido:

Solución de ácido nítrico al 30% (densidad relativa 1,2) o reactivo de Larionova.
Preparación del reactivo de Larionova: Se disuelven 20-30 g de cloruro de sodio en 100 ml de agua destilada cuando se calienta, se deja enfriar y se filtra. Se añade 1 ml de ácido nítrico concentrado a 99 ml de filtrado.

Progreso del estudio:

Se vierten 1-2 ml de ácido nítrico (o reactivo de Larionova) en un tubo de ensayo y con cuidado, a lo largo de la pared del tubo, se coloca la misma cantidad de orina filtrada. La aparición de un fino anillo blanco en la interfaz de los dos líquidos entre el segundo y el tercer minuto indica la presencia de proteína en una concentración de aproximadamente 0,033 g/l. Si el anillo aparece antes de 2 minutos después de la colocación de capas, la orina debe diluirse con agua y la orina ya diluida debe colocarse nuevamente en capas. El grado de dilución de la orina se selecciona según el tipo de anillo, es decir, su anchura, compacidad y tiempo de aparición. Si aparece un anillo filiforme antes de 2 minutos, la orina se diluye 2 veces, si es ancha - 4 veces, si es compacta - 8 veces, etc. La concentración de proteínas se calcula multiplicando 0,033 por el grado de dilución y se expresa en gramos por 1 litro (g/l).

A veces se obtiene un anillo blanco en presencia de grandes cantidades de uratos. A diferencia del anillo de proteína, el anillo de urato aparece ligeramente por encima del límite entre los dos líquidos y se disuelve al calentarlo suavemente.

Determinación cuantitativa de proteínas en orina mediante la turbidez formada por la adición de ácido sulfosalicílico:

Principio del método:

La intensidad de la turbidez durante la coagulación de proteínas con ácido sulfosalicílico es proporcional a su concentración.

Reactivos necesarios:

1. Solución al 3% de ácido sulfosalicílico.

2. Solución de cloruro de sodio al 0,9%.

3. Solución estándar de albúmina - solución al 1% (1 ml de solución que contiene 10 mg de albúmina): se disuelve 1 g de albúmina liofilizada (de suero humano o bovino) en una pequeña cantidad de solución de cloruro de sodio al 0,9% en un matraz de 100 ml de capacidad. y luego diluir hasta la marca con la misma solución. El reactivo se estabiliza añadiendo 1 ml de solución de azida sódica al 5% (NaN3). Cuando se almacena en el refrigerador, el reactivo tiene una validez de 2 meses.

Equipo especial: colorímetro fotoeléctrico.

Progreso del estudio:

Agregue 1,25 ml de orina filtrada a un tubo de ensayo, agregue hasta 5 ml con una solución de ácido sulfosalicílico al 3% y mezcle. Después de 5 minutos, se miden en un fotoelectrocolorímetro a una longitud de onda de 590-650 nm (filtro naranja o rojo) frente a un control en una cubeta con una longitud de camino óptico de 5 mm. El control es un tubo de ensayo en el que se añaden 1,25 ml de orina filtrada a 5 ml de una solución de cloruro de sodio al 0,9%. El cálculo se realiza según el gráfico de calibración, para cuya construcción se preparan diluciones a partir de la solución estándar, como se indica en la tabla.

De cada solución obtenida se toman 1,25 ml y se procesan como muestras experimentales.

La dependencia lineal al construir un gráfico de calibración se mantiene hasta 1 g/l. A concentraciones más altas, la muestra debe diluirse y la dilución debe tenerse en cuenta en el cálculo.

Se pueden obtener resultados falsos positivos si en la orina hay agentes de contraste que contienen yodo orgánico. Por lo tanto, la prueba no puede utilizarse en personas que toman suplementos de yodo; Un resultado falso positivo también puede deberse al uso de sulfas, grandes dosis de penicilina y altas concentraciones de ácido úrico en la orina.

Método Biuret:

Principio del método:

Los enlaces peptídicos de las proteínas con las sales de cobre en condiciones alcalinas forman un complejo violeta. Las proteínas se precipitan con ácido tricloroacético.

Reactivos necesarios:

1. Solución al 10% de ácido tricloroacético.
2. Solución de cobre al 20% (CuSO4∙5H2O).
3. Solución de NaOH al 3%.

Progreso del estudio:

A 5 ml de orina extraída de la cantidad diaria, agregar 3 ml de solución de ácido tricloroacético y centrifugar hasta un volumen constante de sedimento. Se aspira el sobrenadante con una pipeta y después se disuelve el precipitado en 5 ml de solución de NaOH. A la solución se le añaden 0,25 ml de CuSO4, la mezcla se agita y se centrifuga. El líquido sobrenadante se fotomedida a una longitud de onda de 540 nm en una cubeta con un camino óptico de 10 mm frente a agua destilada. La concentración de proteína se calcula utilizando una curva de calibración; al construirla, la concentración de proteína (g/l) se representa en el eje de ordenadas y la densidad óptica en unidades de extinción en el eje de abscisas. En función de la concentración obtenida se calcula la pérdida diaria de proteínas en la orina.

Usando papel indicador (tiras):

La proteína se puede detectar utilizando papel indicador (tiras), producido por Albuphan, Ames (Inglaterra), Albustix, Boehringer (Alemania), Comburtest, etc.

El principio se basa en el fenómeno del llamado error proteico de algunos indicadores ácido-base. La parte indicadora del papel se impregna con azul de tetrabromofenol y tampón citrato. Cuando se humedece el papel, el tampón se disuelve y proporciona el pH adecuado para la reacción del indicador.

En 3,0-3,5, los grupos amino de las proteínas reaccionan con el indicador y cambian su color inicialmente amarillo a azul verdoso, después de lo cual, comparándolos con una escala de colores, se puede estimar aproximadamente la concentración de proteínas en la orina analizada. El principal requisito previo para el funcionamiento adecuado de las tiras reactivas es garantizar un pH en el rango de 3,0 a 3,5 para que se produzca la reacción.

Si el papel está en contacto con la orina que se está analizando durante más tiempo que la exposición especificada en las instrucciones, entonces el tampón de citrato se disuelve en él y luego el indicador reacciona al pH real de la orina, es decir, da una reacción falsa positiva. Debido a que la capacidad tampón es limitada, incluso si se siguen las pautas, se obtienen resultados falsos positivos en muestras de orina demasiado alcalinas (pH > 6,5) y en muestras de orina demasiado ácidas (pH
El número de grupos amino que reaccionan en la composición de las proteínas individuales es diferente, por lo que las albúminas reaccionan 2 veces más intensamente que la misma cantidad de γ-globulinas (proteína de Bence-Jones, paraproteínas) y mucho más intensamente que las glicoproteínas. Sin embargo, si hay una gran cantidad de moco con un alto contenido de glicoproteínas (con inflamación del tracto urinario), las escamas de moco que se depositan en la tira indicadora pueden dar resultados falsos positivos.

La sensibilidad de los lotes de producción individuales de papel indicador, así como de los tipos individuales de papel producidos por la misma empresa, puede variar, por lo que la cuantificación de proteínas mediante este método debe tratarse con precaución. Es imposible determinar la pérdida diaria de proteínas en la orina mediante papel indicador. Así, el papel indicador es inferior a las pruebas químicas, principalmente la prueba con ácido sulfosalicílico, aunque permite estudiar rápidamente una serie de muestras.

Detección de proteína de Bence Jones en orina:

La proteína de Bence Jones se puede excretar en la orina en caso de mieloma, macroglobulinemia de Waldenström.

Es recomendable realizar el estudio sólo si la prueba con ácido sulfosalicílico es positiva. El papel indicador no es adecuado para detectar la proteína Bence Jones.

Principio:

Basado en la reacción de termoprecipitación. Los métodos que evalúan la disolución de la proteína de Bence Jones a una temperatura de 100 °C o la reprecipitación tras el enfriamiento posterior no son fiables, ya que no todos los cuerpos proteicos de Bence Jones tienen las propiedades correspondientes. La detección más fiable de esta paraproteína es mediante precipitación a una temperatura de 40-60 ° C, pero incluso en estas condiciones, es posible que no se produzca precipitación en orina demasiado ácida (pH 6,5), con una densidad relativa baja de orina y con una baja concentración de proteína Bence Jones.

Reactivos necesarios:

Tampón acetato 2 M, pH 4,9.

Progreso del estudio:

Se mezcla 4 ml de orina filtrada con 1 ml de tampón y se calienta durante 15 minutos en un baño de agua a una temperatura de 56 °C. En presencia de proteínas de Bence-Jones, aparece un precipitado pronunciado en 2 minutos; si la concentración de proteína de Bence-Jones es inferior a 3 g/l, la muestra puede resultar negativa. En la práctica, esto es extremadamente raro, ya que en su mayor parte la concentración de proteína de Bence Jones en la orina es significativa.

Con total seguridad, la proteína de Bence Jones puede detectarse mediante investigación inmunoelectroforética utilizando sueros específicos contra las cadenas pesadas y ligeras de las inmunoglobulinas.

Definición de albumosis (proteosis):

Las albumosis son productos de la descomposición de proteínas, cuyo principio de determinación se basa en el hecho de que no se coagulan al hervir, sino que dan una reacción de biuret positiva y se salan con determinadas sales, especialmente sulfato de amonio y acetato de zinc en un ambiente ácido.

La orina normal no contiene albumosis. Puede haber rastros en la orina normal si hay una mezcla de líquido seminal. En patología, las albumosis pueden ocurrir en la orina durante condiciones febriles, transfusiones de sangre y plasma, reabsorción de exudados y trasudados y desintegración tumoral.

Reactivos necesarios:

1. Solución saturada de cloruro de sodio.
2. Solución concentrada de hidróxido de sodio.
3. Una solución débil de sulfato de cobre (casi incolora).

Progreso del estudio:

Se añade una solución saturada de cloruro de sodio (1/3 del volumen) a la orina acidificada con ácido acético, se hierve y se filtra el líquido caliente. Las albumosis pasan al filtrado, en el que su presencia está determinada por la reacción de biuret. Al filtrado se le añade 1/2 volumen de una solución concentrada de hidróxido de sodio y unas gotas de una solución débil de sulfato de cobre. Una prueba positiva da como resultado un color rojo violeta.

Si la prueba con ácido sulfosalicílico es positiva, se calienta la orina. Si la turbidez desaparece y reaparece cuando se enfría, esto significa que la orina contiene albumosa o proteína corporal de Bence-Jones.

La proteinuria es la aparición de proteínas en la orina en concentraciones que permiten detectarla mediante métodos cualitativos.

Distinguir

• Proteinuria renal y
• Proteinuria extrarrenal (postrenal)

proteinuria renal

La proteinuria renal es causada por daño al filtro glomerular o disfunción del epitelio del túbulo contorneado.

Hay proteinuria selectiva y no selectiva. dependiendo de la proporción de determinadas proteínas plasmáticas y urinarias, su peso molecular y carga.

Proteinuria selectiva

La proteinuria selectiva ocurre con una alteración mínima (a menudo reversible) del filtro glomerular y está representada por proteínas de bajo peso molecular (peso molecular no superior a 68 000): albúmina, ceruloplasmina, transferrina.

Proteinuria no selectiva

La proteinuria no selectiva es más común cuando el daño del filtro es más grave, cuando comienzan a perderse proteínas moleculares grandes. La selectividad de la proteinuria es un signo diagnóstico y pronóstico importante.

La proteinuria renal puede ser:

• organico y
• funcional (fisiológico).

Proteinuria renal orgánica

La proteinuria renal orgánica ocurre cuando hay daño orgánico en la nefrona. Dependiendo del mecanismo de aparición predominante, se pueden distinguir ciertos tipos de proteinuria orgánica.

Proteinuria glomerular

Proteinuria glomerular: causada por daño al filtro glomerular, ocurre con glomerulonefritis y nefropatías asociadas con enfermedades metabólicas o vasculares. (glomerulonefritis, hipertensión, factores infecciosos y alérgicos, descompensación cardíaca)

proteinuria tubular

La proteinuria tubular se asocia con la incapacidad de los túbulos para reabsorber proteínas plasmáticas de bajo peso molecular que han pasado a través del filtro glomerular sin cambios. (amiloidosis, necrosis tubular aguda, nefritis intersticial, síndrome de Fanconi)

Proteinuria prerrenal

Proteinuria prerrenal (excesiva): se desarrolla en presencia de una concentración plasmática inusualmente alta de proteína de bajo peso molecular, que se filtra por los glomérulos normales en una cantidad que excede la capacidad fisiológica de los túbulos para la reabsorción. (mieloma, necrosis muscular, hemólisis de eritrocitos)

Proteinuria renal funcional

La proteinuria renal funcional no se asocia con enfermedad renal y no requiere tratamiento.

La proteinuria funcional incluye:

• de marcha,
• emocional,
• frío,
• intoxicación,
• ortostático (solo en niños y solo en posición de pie).

Proteinuria extrarrenal (postrenal)

Con la proteinuria extrarrenal (postrenal), la proteína puede ingresar a la orina desde los tractos urinario y genital (con colpitis y vaginitis, con orina recolectada incorrectamente). En este caso, no es más que una mezcla de exudado inflamatorio.

La proteinuria extrarrenal, por regla general, no supera 1 g/día y suele ser transitoria.

El diagnóstico de proteinuria extrarrenal se ve facilitado por una prueba de tres vasos y un examen urológico.

La proteinuria posrenal ocurre con cistitis y uretritis.

Métodos para determinar la proteína en la orina.

Una condición necesaria al realizar pruebas de presencia de proteínas es la transparencia absoluta de la orina.

Muestras cualitativas

Prueba con ácido sulfosalicílico

Se vierten de 3 a 4 ml de orina filtrada en dos tubos de ensayo. Agregue de 6 a 8 gotas de una solución de ácido sulfosalicílico al 20% al tubo de ensayo. El segundo tubo es el control. Sobre un fondo oscuro se compara el tubo de control con el tubo de ensayo. Si hay proteínas presentes en las muestras de orina, aparece una turbidez opalescente.

El resultado se indica de la siguiente manera:

• reacción débilmente positiva (+),
• positivo (++),
• marcadamente positivo (+++).

La muestra es muy sensible.

También se puede utilizar una muestra seca, cuando a varios mililitros de orina se añaden varios cristales de ácido sulfosalicílico o papel de filtro preimpregnado con una solución de este ácido.

Falsos positivos Puede ser causado por la ingesta de preparados de yodo, sulfonamidas, grandes dosis de penicilina y la presencia de ácido úrico en altas concentraciones en la orina.

Prueba de ácido nítrico (prueba de Geller)

Se vierten 1 a 2 ml de una solución de ácido nítrico al 50% en un tubo de ensayo y luego se coloca una cantidad igual de orina sobre el ácido. Cuando hay proteínas presentes, aparece un anillo blanco en la interfaz de dos líquidos. A veces se forma un anillo violeta rojizo debido a la presencia de uratos ligeramente por encima del límite entre los líquidos. El anillo de urato, a diferencia del anillo de proteína, se disuelve con un ligero calentamiento.

muestra brillante

La prueba de ebullición Bright y las pruebas de detección de proteinuria (muestras colorimétricas secas) prácticamente no requieren reactivos.

Cuando se hierve la orina que contiene proteínas, se desnaturaliza, formando un precipitado en forma de nube o escamas que no son solubles en ácido acético al 6%, a diferencia de las sales de fosfato. Las pruebas de detección se basan en la capacidad de una proteína (albúmina) para cambiar el color del papel recubierto con un indicador (generalmente azul de bromofenol) y un tampón. La relación directa entre la intensidad del color del papel indicador (Albufan, Albutest - República Checa; Labstix, Multistix - EE. UU.; Comburtest - Alemania) y la cantidad de proteína nos permite estimar aproximadamente la cantidad de proteinuria. Sin embargo, las pruebas de detección utilizadas actualmente no están exentas de inconvenientes. En particular, el azul de bromofenol no detecta la proteína de Bence Jones.

Métodos cuantitativos

Método Brandberg-Roberts-Stolnikov

El método se basa en una muestra cualitativa con ácido nítrico. El procedimiento de prueba se describe arriba. La aparición de un anillo fino en el límite de los dos líquidos entre el segundo y el tercer minuto después de la estratificación indica la presencia de 0,033 g/l de proteína en la orina (la concentración de proteína en la orina generalmente se expresa en ppm, es decir, gramos por litro). Si el anillo aparece antes de los 2 minutos, la orina debe diluirse con agua. Seleccione una dilución de orina tal que cuando se aplique una capa de ácido nítrico, aparezca un anillo en el minuto 2-3. El grado de dilución depende del ancho y compacidad del anillo y del momento de su aparición.

La concentración de proteínas se calcula multiplicando 0,033 g/l por el grado de dilución de la orina (Tabla 8).

El método de dilución de Roberts-Stolnikov tiene una serie de desventajas: es subjetivo, requiere mucha mano de obra y la precisión para determinar la concentración de proteínas disminuye a medida que se diluye la orina.

Los métodos más convenientes y precisos son los métodos nefelométrico y biuret.

método nefelométrico

Basado en la propiedad de las proteínas de producir turbidez con ácido sulfosalicílico, cuya intensidad es proporcional a la concentración de la proteína. Se vierten 1,25 ml de orina filtrada en un tubo de ensayo graduado y se añade una solución al 3% de ácido sulfosalicílico hasta un volumen de 5 ml, se agita bien. Después de 5 minutos, se mide la extinción en FEK-M (o cualquier otro fotómetro) a una longitud de onda de 590–650 nm (filtro naranja o rojo) frente al control en una cubeta con un espesor de capa de 0,5 cm. Para el control, 1,25 ml. Se utiliza orina filtrada (lo mismo), a la que se le añade una solución isotónica de cloruro de sodio hasta un volumen de 5 ml.

Primero se construye una curva de calibración de la dependencia del valor de extinción de la concentración de proteínas. Para preparar diversas concentraciones de proteínas se utiliza una solución estándar de albúmina (de suero humano o bovino). Complete la hoja de trabajo.

método biuret

Se basa en la capacidad de las proteínas para producir, con sulfato de cobre y álcali cáustico, un complejo de biuret de color violeta, cuya intensidad de color es directamente proporcional a la cantidad de proteínas. A 2 ml de orina se añaden 2 ml de solución de ácido tricloroacético para precipitar la proteína y se centrifuga. Se vierte el líquido sobrenadante. Al precipitado (proteína) se le añaden 4 ml de una solución de NaOH al 3% y 0,1 ml de una solución de sulfato de cobre al 20%, se agita y se centrifuga. El líquido sobrenadante violeta se fotomedida a una longitud de onda de 540 nm (filtro verde) frente a agua destilada en una cubeta con un espesor de capa de 1,0 cm. La concentración de proteínas se determina a partir de una tabla obtenida experimentalmente (se construye una curva de calibración como en el caso anterior). método).

prueba ortostática

Indicado ante sospecha de proteinuria ortostática y nefroptosis. Después de vaciar completamente la vejiga, el sujeto mantiene una posición horizontal durante 2 horas luego, sin levantarse, da una porción (de control) de orina. Durante las siguientes 2 horas, el sujeto camina continuamente, manteniendo la posición de máxima lordosis lumbar (sujetando un bastón detrás de la zona lumbar), tras lo cual expulsa una segunda porción de orina. En ambas porciones de orina se determina la concentración de proteínas y el contenido de proteínas en gramos, y en caso de nefroptosis, se determina la cantidad de glóbulos rojos en 1 ml. Con proteinuria ortostática, se detecta proteinuria o un aumento en el contenido inicial de proteínas en gramos en la segunda porción. La aparición de hematuria, a menudo en combinación con trazas de proteinuria en la segunda porción, es característica de la nefroptosis.

Determinación de uroproteínas de Bence Jones.

Las proteínas de Bence Jones son paraproteínas termolábiles de bajo peso molecular (peso molecular relativo 20 000 a 45 000) que se encuentran principalmente en el mieloma múltiple y la macroglobulinemia de Waldenström. Son cadenas ligeras de inmunoglobulinas. Debido a su bajo peso molecular, las cadenas L pasan fácilmente de la sangre a través de un filtro renal intacto a la orina y pueden detectarse allí mediante una reacción de termoprecipitación. Es recomendable realizar el estudio sólo si la prueba con ácido sulfosalicílico es positiva. La determinación se lleva a cabo de la siguiente manera. A 10 ml de orina se le añaden 3-4 gotas de una solución de ácido acético al 10% y 2 ml de una solución saturada de cloruro de sodio, se calienta cuidadosamente en un baño de agua y se aumenta gradualmente la temperatura. Si hay proteínas de Bence Jones en la orina, a una temperatura de 45 a 60 ° C aparece una turbidez difusa o se forma un precipitado blanco denso. Al calentarlo más hasta ebullición, el precipitado se disuelve y al enfriarlo reaparece. Esta prueba no es lo suficientemente sensible y debe realizarse mediante electroforesis e inmunoelectroforesis.